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促进排铅功能评价方法修改说明
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  一、承担单位
四川大学华西公共卫生学院分析测试中心为本项目的牵头单位。该单位是国家标准“食品安全性毒理学评价程序和方法”(GB15193)、保健食品检验与评价技术规范(2003年版)等多项国家标准和技术规范的起草单位之一,是卫生部认定的保健食品功能学检验机构,在保健食品功能学评价及其方法研究、相关国家标准与技术规范的起草和方法验证等方面有丰富的经验。

  二、主要工作过程
为了做好技术规范的制定工作,国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司(简称保化司)于2009年4月召开了“保健食品功能评方法及有关程序修订”课题协作组工作会议,参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、广东省疾病预防控制中心、上海市疾病预防与控制中心、北京市疾病预防控制中心、四川大学华西公共卫生学院、中国中医研究院东直门医院和国家食品药品监督管理局保健食品审评中心的专家近15人,会上对“保健食品功能评价方法及有关程序修订”修订的原则和框架作了充分的讨论,在讨论稿的基础上,又分别征求了相关专家的意见。本项目于2009年11月启动。由四川大学华西公共卫生学院分析测试中心牵头成立项目协作组,四川省疾病预防控制中心和湖南省疾病预防控制中心为本项目的协作单位。2009年12月到2010年2月进行了广泛的文献调研和意见征询等前期工作,
2010年2月底召开了《促进排铅功能评价程序与检验方法》修订课题协作组第一次工作会议,根据前期调研和该课题立项时确定的主要目标和拟修改的主要内容,对促进排铅功能评价程序与检验方法修订的原则以及具体的修订内容等进行了充分的讨论,制定了工作计划、进度安排和初步的修订方案。其后又分别征求了相关专家和检测机构的意见,对修订方案初稿再次进行了修改。
2010年4~8月由四川大学华西公共卫生学院分析测试中心负责、四川省疾病预防控制中心配合,按修订方案进行了动物实验研究。并于2010年8月31日在北京由保化司组织的保健食品功能学评价程序与检验方法修订中期汇报与讨论会上汇报了该项目的进展情况和存在问题。根据动物实验研究结果和中期汇报会上专家的意见,2010年10月召开了《促进排铅功能评价程序与检验方法》修订课题协作组第二次工作会议,重点讨论了动物试验方法的修改和指标选择方面的问题,尤其是能否将脑铅指标纳入的问题,同时对促进排铅功能人体试食试验方法修订的原则以及具体的修订内容等作了进一步的讨论。其后,由四川省疾病预防控制中心再次对动物试验——尤其是能否纳入脑铅指标的问题进行了验证试验;由湖南省疾病预防控制中心对该功能人体试食试验方法与指标进行了验证。在此基础上形成了《促进排铅功能评价程序与检验方法(初稿)》,在征求相关专家和检测机构的意见后,对该修订稿再次进行了修改。2011年1月召开了课题协作组第三次工作会议,综合各方意见最终形成了《促进排铅功能评价程序与检验方法(征求意见稿)》。2011年4月1日在北京由保化司组织了促进排铅等四个功能方法修改稿汇报和征求意见会,征求了与会专家的意见,对此“征求意见稿”作了进一步的修改与完善。

  三、编制原则
1.合法性原则:修订工作符合国家相关法律法规并遵循相关管理部门的政策要求。
2. 科学性原则:修订工作遵循科学性的原则,广泛征求相关领域专家的意见并进行文献调研,各项技术指标应具有科学依据并经科学验证。
3. 先进性原则:注意国内管理部门发布的新管理措施,兼顾了技术发展的前瞻性。
4. 实用性原则:从保护公众身体健康的角度出发,充分考虑国情,兼顾我国保健食品功能检测机构的水平,对内容进行客观量化和具体明确化,尽量提高可操作性。
5.协调性原则:尽可能与本规范的其他部分一致,注意合理性与有效性、通俗性和规范性之间的关系。

  四、 主要修订内容及新旧规范对比
本修订稿与原规范比较,具体修改部分见下表。


序号

原规范

现规范

修订理由

序号

内容

序号

内容

  1

(程序)
7.2试验原则

  7.2.2根据受试样品作用原理的不同,预防性高铅动物模型和治疗性高铅动物模型选其一进行实验。

  

  删去

方法中已取消治疗性高铅动物模型

  2

(程序) 7.3结果判定
7.3.1

  动物实验:骨铅和肝组织铅任一指标明显降低,可判定该受试样品促进排铅功能动物实验结果阳性。

  3.1

  动物实验:实验组与模型对照组比较,骨铅含量显著降低,同时血铅或肝铅显著降低,可判定该受试样品动物实验结果为阳性。

提高了判断阳性结果的标准

  3

(程序) 7.3结果判定
7.3.2

  人体试食试验:任一观察时点尿铅排出量或总尿铅排出量明显增加并对总尿钙、总尿锌的排出无明显影响,或总尿钙、总尿锌排出增加的幅度小于总尿铅排出增加的幅度,可判定该受试样品具有促进排铅功能的作用。

  3.2

  人体试食试验:试食组与对照组组间比较,至少两个观察时点尿铅排出量增加且显著高于试验前,或总尿铅排出量明显增加。同时,对总尿钙、总尿锌的排出无明显影响,或总尿钙、总尿锌排出增加的幅度小于总尿铅排出增加的幅度,可判定该受试样品具有促进排铅功能。

  提高了判断阳性结果的标准

  4

(方法)
1.2 实验动物

  推荐使用近交系动物,单一性别,成年小鼠(18-22克)或大鼠(150-200克),小鼠每组10-15只,大鼠每组8-12只。

  1.2

  推荐使用成年大鼠,单一性别,体重150-200克,每组8-12只。小鼠则应使用近交系动物,单一性别,体重18-22克,每组10-15只。

  推荐使用大鼠,因其结果比小鼠更接近于人

  5

1.3剂量分组及受试样品给予时间

  实验设三个剂量组、一个空白对照组和一个模型对照组,以人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)为其中的一个剂量组,另设二个剂量组,必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天,必要时可延长至45天。

  1.3

  实验设三个剂量组、一个空白对照组和一个模型对照组,三个剂量组中应包括一个人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)剂量组。受试样品给予时间30天,必要时可延长至45天。

  删去“必要时设阳性对照组”

  6

1.4 实验设计

  实验可选预防性高铅动物模型或治疗性高铅动物模型任一种。

  1.4

  本实验使用预防性高铅动物模型。

  取消治疗性高铅动物模型

  7

1.4.1 预防性高铅动物模型

  实验期间,在模型对照组、受试样品各剂量组饮用醋酸铅水溶液或喂饲含铅饲料造模的同时,各剂量组灌胃给予受试样品或喂饲含不同剂量受试样品的饲料。空白对照组给予去离子水或基础饲料。阳性对照组的造模方式同模型对照组。阳性对照物用有明确排铅效果的物品,推荐使用二丁基巯二酸或Na2 CaEDTA。

  1.4

  实验期间,在模型对照组、受试样品各剂量组饮用醋酸铅水溶液(推荐浓度为0.1%~0.2%)或喂饲含铅饲料造模的同时,各剂量组灌胃给予受试样品或喂饲含不同剂量受试样品的饲料。空白对照组给予去离子水或基础饲料。

  删去阳性对照组相关内容;增加饮水的醋酸铅浓度范围

  8

1.4.2治疗性高铅动物模型

  模型对照组、受试样品各剂量组饮用醋酸铅水溶液或喂饲含铅饲料,使动物体内蓄积一定量铅后停止造模给铅,再给予模型对照组去离子水或基础饲料,各剂量组灌胃给予受试样品或喂饲含不同剂量受试样品的饲料。空白对照组给予去离子水或基础饲料。阳性对照组的造模方式同模型对照组,阳性对照物用有明确排铅效果的物品,推荐使用二丁基巯二酸或Na2 CaEDTA。

  

  删去此段

  取消治疗性高铅动物模型

  9

1.5 观察指标

  于末次给予动物受试样品及去离子水或低铅饲料24小时后,取血,脱颈处死动物,取肝、股骨称重后进行湿式消化,于石墨炉原子吸收分光光度计测定铅含量。

  1.5

  于末次给予动物受试样品24小时后,称量动物体重。取血并处死动物,取肝和双侧股骨称重。取适量血、肝、股骨样品进行湿式消化,使用石墨炉原子吸收分光光度计测定铅含量。

  描述更准确

10

1.6 数据处理和结果判定

  结果判定:在动物模型成立的前提下,实验组与模型对照组比较,肝组织铅或骨铅含量明显下降,经统计处理差异有显著性,可判定该受试样品动物实验结果阳性。

  1.6

  结果判定:在动物模型成立的前提下,实验组与模型对照组比较,同时骨铅含量显著降低,血铅或肝铅显著降低,可判定该受试样品动物实验结果为阳性。

  提高了判断阳性结果的标准

11

2.1 受试者纳入标准

  有密切铅接触史,血铅含量较高的自愿受试者,推荐使用血铅水平在100μg/L(儿童)和200μg/L(成人)以上的高铅接触人群。

  

  有密切铅接触史,血铅含量较高的自愿受试者。推荐选择属于铅吸收状态的成人,即血铅在200mg/L~400mg/L(1mmol/L~ 2mmol/L)范围内,或尿铅在70mg/L~120mg/L(0.34mmol/L ~0.58mmol/L)范围内者。

  首选铅吸收人群
考虑人体试食试验安全,删除儿童

12

2.1 受试者排除标准

  

  

  增加“2.2.1 血铅或尿铅过高,有明显铅中毒症状者。”

  同上

13

2.4 受试样品的剂量和使用方法

  试食组按推荐服用方法、服用量每日服用受试样品,对照组可服用安慰剂或采用空白对照,也可用具有同样作用的阳性物。受试样品给予时间30天,必要时可延长至45天。试验期间受试者不改变生活、工作环境,不改变原来生活、饮食习惯。

  2.4

  试食组按推荐服用方法和服用量每日服用受试样品,对照组可服用安慰剂或采用空白对照。受试样品给予时间30天,必要时可延长至45天。试验期间受试者不改变生活、工作环境,不改变原来生活、饮食习惯。

  取消阳性对照,原因是结果无法比较,且已设定了受试者的血铅上限,故不存在安全隐患

14

2.5.2.2

  血铅、尿铅含量测定:采集试食试验前、试验后血液,试食前及试食第10天、20天和结束时的24小时尿液样本(可以晨尿代替24小时尿,尿肌酐校正),测定血铅、尿铅含量。总尿铅为三次尿铅测定值之和。

  2.5.2.2

  血铅、尿铅含量测定:采集试食试验前、试验后血液,以及试食前及试食第10天(如进行45天试验则为第15天)、20天(如进行45天试验则为第30天)和结束时的24小时尿液样本(亦可以晨尿代替24小时尿,但需用尿肌酐进行校正),测定血铅、尿铅含量。总尿铅为试验开始后三次尿铅测定值之和。

  描述更准确

15

2.6 数据处理和结果判定

  结果判定:试食前后自身比较,任一观察时点尿铅排出量明显增加;试食后,试食组与对照组组间比较,任一观察时点尿铅排出量或总尿铅排出量明显增加且对总尿钙、总尿锌的排出无明显影响,或总尿钙、总尿锌排出增加的幅度小于总尿铅排出增加的幅度,可判定该受试样品具有促进排铅功能作用。

2.6

  结果判定:试食后,试食组与对照组组间比较,至少两个观察时点尿铅排出量增加且显著高于试验前,或总尿铅排出量明显增加。同时,对总尿钙、总尿锌的排出无明显影响,或总尿钙、总尿锌排出增加的幅度小于总尿铅排出增加的幅度,可判定该受试样品具有促进排铅功能。

  提高了判断阳性结果的标准

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